樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。

（5）培養(yǎng)細胞

檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規(guī)格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

金屬硫蛋白(MT)試劑盒灰氈毛忍冬皂乙四丁氫氧化銨 ~40% 水溶液，離子色譜級2--1,3-二化咪唑鎓 90%

金屬硫蛋白(MT)試劑盒茴芹內(nèi)酯2,4,5-三 分析標準品代二哌啶碳鎓六氟磷鹽 98%

小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)試劑盒茴香腦叔戊 97%代三吡咯烷鏻六氟磷鹽 98%

小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)試劑盒肌氨DL-α-酚琥珀酯 分析標準品多肽試劑TCTU 98%

小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)試劑盒肌三氧鎓四氟鹽 96%2--1,3-二咪唑六氟磷鹽 98%

小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)試劑盒(三硅烷)重氮 2.0M 己烷溶液3-(二乙氧磷酰氧)-1,2,3-苯并三-4- 98%

小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)試劑盒雞屎藤三(2-氨乙) 97%代磷二乙酯 純度 ≥90%

小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)試劑盒雞屎藤酯2-硫脲嘧啶 分析標準品2-(2-吡啶-1-)-1,1,3,3-四脲四氟鹽  99%

黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)試劑盒雞屎藤四己硫氫銨 用于離子色譜, ≥99.0% (T)N,N'-二環(huán)己碳二亞 99.0%

黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)試劑盒積雪草N,N,N',N'-四-1,3-二 99%N,N'-琥珀酰亞碳酯 98%

高分子量角蛋白(CK-HMW)試劑盒積雪草N,N,N',N'-四-1,3-二 97%4-二氨吡啶 99%

高分子量角蛋白(CK-HMW)試劑盒吉馬替康2,4,5-三苯 分析標準品,99%4,4'-二氧三苯 98%

肝癌抗原(PHC)試劑盒吉馬1,2,3,4-四苯 分析標準品,98%4,5-二咪唑 98%

肝癌抗原(PHC)試劑盒吉妥辛5-硫代-D-葡萄糖 96%4,5-二咪唑 99%

凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)試劑盒 三溶液 50%溶液二吡咯烷(N-琥珀酰亞氨氧)碳六氟磷鹽  98%

凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)試劑盒 加蘭他敏二十三烷 分析標準品,99.5%4-(4,6-二氧三)-4-嗎啉鹽鹽 97%
TGFBR3轉(zhuǎn)化生長因子β受體3ELISA試劑盒熒光染料CFSE(CFDA-SE)，是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞。CFSE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料，可以結(jié)合細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。CFSE在結(jié)構(gòu)上將酚羥基部位改造成AM 體，所以自身不發(fā)熒光，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，在活細胞內(nèi)與胞內(nèi)蛋白共價結(jié)合，進入細胞內(nèi)的CFSE的AM 部位能被細胞內(nèi)酯酶水解發(fā)出綠色熒光。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基部位結(jié)合，固定在細胞內(nèi)，不會漏出細胞外。CFSE 進入細胞后定位于細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核，在細胞核的熒光強。

在細胞分裂增殖過程中，CFSE的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。CFSE標記細胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀(FL1 通道)根據(jù)熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2的熒光強度)，二次(1/4的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數(shù)的細胞。CFSE可檢測分裂次數(shù)多達八次甚至更多。經(jīng)CFSE標記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。

CFSE標記的細胞用于體內(nèi)觀察可以長達數(shù)周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。CFSE 毒性小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準確和更安全地得到想要的實驗數(shù)據(jù)。

CFSE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK 細胞等其它細胞的增殖檢測。

CFSE標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=496 nm,λem=516 nm。流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為516nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFSE標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。

儲存條件：CFSE須-20℃避光保存，注意防潮。

有效期：六個月。